Lab 1: Antibiotikaresistens


Syfte: Syftet med denna undersökning är bl a att tydligt påvisa hur känslig EN sorts bakterie är för olika antibiotika. Ett annat syfte är att testa Gramfärgning, steril- och renstrykningsteknik.


Material:

¤ olika näringspulver

¤ Agar

­¤ Petriskålar, 90 mm

¤ odlingsskåp, 37ºC

¤ platinaögla

¤ antibiotikastjärnor

¤ mikropipetter


Gör så här:

¤ Gjut 8 odlingsplattor (dela recepten som står på burkarna med 5!)

¤ Märk plattorna med gruppens “tagg” + datum

¤ Eftersom det finns färdiga bakteriekolonier så kan ni göra en renstrykning så fort era plattor har stelnat. https://ehinger.nu/undervisning/index.php/kurser/biologi-2/laborationer-och-oevningar/cellbiologi-genteknik/5994-sterilteknik-renstryk-av-en-bakterie.html

¤ Inkubera (upp-och-ner) i odlingsskåp, 37ºC, 24 h obs! Inte mer än 24h! (kanske 20 h räcker?)

¤ Eftersom det finns färdiga bakteriekolonier kan ni även testa antibiotikaresistens direkt. Välj en färgglad koloni som verkar att växa starkt! Använd steril platinaögla för att flytta den önskade kolonin till er egen odlingsplatta. Tillsätt 50 μl vatten och fördela vätskan + bakterierna jämt över odlingsytan med en böjd glaspipett. Tillsätt försiktigt en antibiotikastjärna. Obs! Flambera (sprit + eld!) pincetten INNAN ni använder den för att ta upp antibiotikastjärnan. Obs! Viktigt att “trycka ner” alla flikar av antibiotikastjärnan ordentligt i odlingsytan! Använd lämpligt vapen för detta, men se till att det är flamberat alt. Steriliserat innan! Inkubera (INTE upp-och-ner!) i odlingsskåp, 37ºC, 24 h obs! Inte mer än 24h!

¤ Odla upp några miljarder kloner av Bacillus megaterium genom att föra över en koloni till en av era odlingsplattor. Obs! Sterilteknik viktig här! Så fort ni lyfter på locket till provröret med Bacillus megaterium så för in provrörets mynning in i brännarens eldsflamman några sekunder. Använd sedan steril platinaögla för att hämta en koloni från provröret. Bränn av provrörets mynning igen och sätt på korken. För över kolonin till en av era egna odlingsplattor. Inkubera (upp-och-ner) i odlingsskåp, 37ºC, 24 h obs! Inte mer än 24h!

¤ Testa att odla Bacillus megateriumMcKonkey agar och se om det funkar. Inkubera (upp-och-ner) i odlingsskåp, 37ºC, 24 h obs! Inte mer än 24h!

¤ spara gärna några odlingsplattor i kylskåpet (förvara dem upp-och-ner!) om det blir några över.

¤ Testa även att göra en Gramfärgning av Bacillus megaterium.