1. Hur mycket DNA finns i en banan?


Hypotes! Enas i gruppen om ett professionellt antagande. Undersök därefter. Resultatet får ni först imorgon, eftersom DNA måste torka över natten.



Material:

¤ iskall etanol (I FRYSEN)

¤ lösning ”Membran” (för att lösa upp cell- & kärnmembran): 0.75 g NaCl (s) + 2.5 g NaHCO3 (s) + 1 cm3 YES löses i 60 cm3 dest. vatten. Hålls kylt på isbad.

¤ banan/lök/lever/vetekli/ett grönt fint päron eller sperma (från strömming)

¤ 3 M natriumacetatlösning, NaAc


Extraktion av DNA:

¤ Väg en hel banan. Anteckna vikten.

¤ Skär upp en bit av bananen, väg och anteckna vikten.

¤ Använd stavmixern och mixa bananbiten + 20 cm3 dest. vatten + 20 cm3 lösning ”Membran”. Mixa tills det blir en jämn ”soppa”. Nu slås växtcellens väggar sönder av de skarpa knivarna! Detergenterna i diskmedlet löser upp cell- & kärnmembran och DNA kommer att hamna i ”soppan”! DNA är lösligt i vatten.

¤ Rör med en glasstav i ca 2 min och centrifugera i en minut i 60-tals centrifugen.

¤ Överför överfasen till en liten bägare

¤ Tillsätt 10 droppar 3 M natriumacetatlösning och rör om. DNA ”trivs inte” när man ökar salthalten. Det får därför svårare att vara löst i vattnet!

¤ Häll över i stort provrör (?). KANSKE går det lika bra att ha löningen kvar i den lilla bägaren!

¤ Luta provröret/bägaren i 45º och häll försiktigt kall etanol utmed kanten av provröret. Vicka provröret/bägaren försiktigt fram och tillbaka några gånger för att öka kontaktytan mellan de två faser som bildas. DNA är inte lösligt i etanol

¤ Vänta någon minut och se; -DNA faller ut i gränsskiktet mellan de två faserna!

¤ Väg en pappershandduk och fånga upp allt DNA på denna. Skriv namn på och lägg i fönster för torkning. Väg DNA nästa dag. Räkna ut svaret på frågeställningen!




  1. VISA kromosomer i lökcellens kärna:


Naturligtvis behöver du mikroskop, men det har du förstås redan listat ut!

Läraren har lurat löken (vilken intelligent lärare som kan lura en lök!) så den tror att den skall få leva…. Detta genom att

placera löken ovanför vatten. Då aktiveras nämligen speciella celler på lökens undersida och genom mitos bildas vita

rottrådar som söker sig ned mot vattnet. I SPETSEN på dessa rottrådar finns ett område med hög celldelningstakt.

 Här sker mitos! (se sid 59!) Det är detta område ni är ute efter!


Ni skall alltså leta efter kromosomer i celler i rotspetarna hos lök.


Metoden går ut på att mjuka upp (värme + saltsyra) cellväggarna hos rotspetsens celler och använda ett färgämne (orcein)

som färgar DNA rött. När rotspetsarna mjuknat upp pressas de ut till ett tunt lager och studeras i mikroskop.



Metod:

1. Bryt av 3 rottrådar (obs! tag bort hela rottråden från löken!) och kapa av 4 mm av rotspetsen med skalpell, släng resten av rottråden.

2. Lägg rotspetsarna i ett provrör och fyll på med 1-2 cm saltsyra [2 mol/l],  + 10 droppar färglösning. Rotspetsarna skall vara täckta av lösningen. Värm i vattenbad (37ºC) 10 minuter.

3. Rengör tre objektglas. Lägg en droppe färglösning + en rotspets på varje glas. Sönderdela rotspetsen ordentligt i färgen med hjälp av en preparernål. Håll gärna på och “picka” några minuter. Det blir bättre infärgning då.

4. Låt färgen verka i 5 minuter.

5. Lägg på ett täckglas och ovanpå detta en pappershandduk.

6. “Squasha”, dvs sprid ut materialet till ett tunnt skikt genom att pressa ordentligt med tummen rakt uppifrån på täckglaset. Stå upp vid bänken så får du mer kraft vid “squashandet”.

7. Studera preparatet i mikroskop. Har du TUR så hittar du celler som håller på att dela sig (= synliga kromosomer)!

8. Fota celler som du ser! Fokusera på cellkärnan! Visa med pilar vad det är man ser i dina bilder. Är du tveksam om vad du ser, så kan du titta i boken på s. 51 + 59



Tips: http://vlab.amrita.edu/?sub=3&brch=188&sim=1102&cnt=1 (Karyotyp för lök!)

http://www.nature.com/scitable/topicpage/mitosis-14046258 (bra teori och fantastiska teckningar från 1880-talet!)

http://www.biology.arizona.edu/cell_bio/activities/cell_cycle/cell_cycle.html   (bra träning inför labben!)