Lab: DNA och Kromosomer

kromosomer i lök


Material:

¤ HCl [2mol/l]

¤ orcein

¤ tur!


Metod:

1. Jobba i grupp

2. Bryt av 2-3 rottrådar (obs! tag bort hela rottråden från löken!)

3. Lägg rottrådarna med spetsen neråt i ett provrör och fyll på röret med 1-2 cm saltsyra [2 mol/l], + 10 droppar orceinlösning. Rotspetsarna skall vara täckta av lösningen. Värm i vattenbad 10 minuter.

4. Rengör objektglas. Lägg en droppe färglösning + en rotspets på varje glas. Sönderdela rotspetsen ordentligt i färgen med hjälp av en preparernål. Håll gärna på och “picka” några minuter. Det blir bättre infärgning då.

5. Låt färgen verka i 5 minuter.

6. Lägg på ett täckglas och ovanpå detta en pappershandduk, så att en av täckglasets kanter syns.

7. “Squasha”, dvs sprid ut materialet till ett tunnt skikt genom att pressa ordentligt med tummen rakt uppifrån på täckglaset. Stå upp vid bänken så får du mer kraft vid “squashandet”.

8. Studera preparatet i mikroskop. Har du TUR så hittar du celler som håller på att dela sig!

9. Fota de celler som du ser och visa med pilar vad det är man ser i dina bilder. Är du tveksam om vilka faser du ser så kan du använda dig av länken nedan


Frågor att besvara:

a)–Varför letar man efter celldelningsfaser i rotspetsen och inte mitt på rottråden?

b) –Vilken uppgift har orceinet?

c)–Villken uppgift har saltsyran?

d) –Varför “squashar” man?

e) - Befinner sig de celler vi studerar i Mitos eller i Meios? Motivera ditt svar!


Redovisa:

Fota celler i olika faser av celldelning. Beskriv vad du ser! Hittar du inga celldelningsfaser, så rita av celler i Interfas.

(Eventuellt kan du låna färdiga preparat av läraren?) Besvara frågorna.

När du skriver bakgrundsfakta, kan du exempelvis skriva om:

kromatin, cellcykeln, nukleoler, kromosomer, orcein, mitos, mm

http://www.biology.arizona.edu/cell_bio/activities/cell_cycle/cell_cycle.html



Lab: DNA och Kromosomer

DNA i banan


Material:

¤ iskall etanol

¤ extraktionslösning: 0.75 g NaCl + 2.5 g NaHCO3 + 0,1g proteinas K + 1 cm3 YES löses i 60 cm3 dest. vatten. Hålls kylt på isbad.

¤ banan

¤ natriumacetatlösning, NaAc [3 mol/liter]


Extraktion av DNA:

¤ Väg en hel banan. Anteckna vikten.

¤ Skär upp en bit banan (några centimeter lång), väg och anteckna vikten.

¤ Mosa bananen (stavmixer!) i 20 cm3 avjonat vatten och blanda med samma volym lösning A.

¤ Rör med en glasstav i ca 2 min och centrifugera 1 minut i centrifugen.

¤ Överför överfasen till en bägare

¤ (Om nödvändigt: -Filtrera genom tyg så att eventuellt ”skräp” försvinner)

¤ Tillsätt 10 droppar 3 M natriumacetatlösning och rör om.

¤ Häll över i stort provrör/liten bägare

¤ Luta provröret och häll försiktigt kall etanol utmed kanten av provröret. Vicka provröret fram och tillbaka några gånger för att öka kontaktytan mellan de två faser som bildas.

¤ Vänta någon minut och se; -DNA faller ut i gränsskiktet mellan de två faserna!


Kvantifiering av DNA:

¤ Väg en pappershandduk och fånga upp allt DNA på denna. Skriv namn på och lägg i fönster för torkning. Väg nästa dag. Räkna ut hur mycket DNA som fanns i hela bananen!


Redovisa:

En ”vanlig rapport”, men Du som vill ha högre betyg kan skriva bakgrundsfakta om VAD DE olika ämnena gjorde…. (-Varför tillsattes de olika ämnena? -Vad hände egentligen i provröret?)


Länkar:

https://www.sciencelearn.org.nz/resources/2036-dna-extraction

http://agscientific.com/blog/2013/02/10-questions-you-want-to-ask-about-proteinase-k/