Laboration: Bakterier

1. Gjut odlingsplattor

2. Färga och fota bakterier

3. Undersök antibiotikaresistens

4. Odla på selektivt medium

1. Gjut odlingsplattor:

Tag 100 ml vatten i en bägare. Tillsätt 0,8g näring och 2g agar. Lägg på ett lock och koka upp.

Tag bort den varma bägaren från plattan! Lyft på locket till en odlingsskål och fyll till hälften. Lägg på locket. Fortsätt med de andra odlingsskålarna. Låt stelna i 20 minuter.

2. Färga och fota bakterier: https://www.youtube.com/watch?v=sxa46xKfIOY

¤ Tag ett rent objektglas. Lägg en droppe vatten mitt på objektglaset. Använd steril platinaögla och överför en koloni B. Megaterium till droppen.

¤ Sterilisera platinaöglan och överför en koloni med E.coli till samma vattendroppe. Blanda ordentligt!

¤ Använd en hårtork för att torka bort vattnet.

¤ Fixera bakterierna på objektglaset genom att hålla objektglaset över en låga några sekunder.

¤ Tillsätt en droppe lila färg (kristallviolett) och låt verka 1 minut.

¤ Skölj bort den lila färgen genom att doppa objektglaset i en bägare med vatten.

¤ Tillsätt några droppar jod-lösning på den lila fläcken. Låt verka 1 minut.

¤ Skölj bort jod-lösningen genom att doppa objektglaset i en bägare med vatten.

¤ Luta objektglaset och droppa etanol på fläcken. Fortsätt tills etanolen inte längre färgas!

¤ Skölj bort etanolen genom att doppa objektglaset i en bägare med vatten.

¤ Tillsätt några droppar röd färg (Saffranin). Låt verka 1 minut.

¤ Skölj bort den röda färgen genom att doppa objektglaset i en bägare med vatten.

¤ Torka med hårtorken och leta efter bakterier i mikroskopet. Fota!

3. Undersök antibiotikaresistens:

¤ Tillsätt 200 mikroliter vatten till ett litet provrör.

¤ Använd en steril platinaögla och överför en koloni av E.coli till vattnet. Blanda runt ordentligt!

¤ Märk en odlingsskål med “E.coli”, + “ert namn” + “datum”

¤ Häll ut vattnet med bakterier på ytan av näringsagarn.

¤ Använd en steril glaspipett och stryk ut vattnet på hela odlingsytan!

¤ Tillsätt 1 antibiotikalapp och tryck ner den försiktigt i agarn med en steril pincett.

¤ Tillsätt flera olika antibiotikalappar på samma sätt. Obs! Lapparna måste ha avstånd mellan varandra!

¤ Lägg på locket på odlingsskålen och sätt in i odlingskåpet (37°C) i 20 timmar

4. Odla på selektivt medium:

¤ Rita ett streck på baksidan av en odlingsskål med Näringsagar (dela ytan 50/50)

Den ena halvan skall ha rubriken “E.coli”, den andra halvan skall ha rubriken “B.megaterium”

¤ Gör samma sak med en odlingsskål med McConkey-agar (röd!)

¤ Använd en steril platinaögla och överför en koloni med E.coli till odlingsplattan.

¤ Sterilisera platinaöglan och överför en koloni med B.megaterium till odlingsplattan

¤ Skriv namn + datum på sidan av odlingsskålen

¤ Lägg på locket på odlingsskålen och sätt in i odlingskåpet (37°C) i 20 timmar